人層連蛋白/板層素（LN）ELISA試劑盒的操作步驟：

   1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml，4℃ 。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次。

    2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。

   3、加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

   4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

   5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

  6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

技術(shù)原理：

    （1）抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。

    （2）結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。

    （3）酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。

    （4）受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結(jié)合在固相載體上。

    （5）此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。

    （6）加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復性好。以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。