1.重要的洗滌：

　　如果洗滌不充分，會(huì)造成一系列的差異和高背景zui后導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差大。如果未結(jié)合的材料殘留在微孔板中，那么它會(huì)增加背景噪音。條件允許的情況下，適當(dāng)增加洗滌液中的鹽濃度，這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過(guò)高，懷疑洗滌不夠時(shí)，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。

　　2.關(guān)鍵的封閉：

　　封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。如果背景過(guò)高，懷疑封閉不充分，那么可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。

　　目前主要有兩種類(lèi)型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。使用的類(lèi)型須取決于多個(gè)因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測(cè)試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。

　　3.抗體濃度須優(yōu)化：

　　如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn)，切勿使用過(guò)多的一抗或二抗。

　　第四、檢測(cè)試劑要適量：

　　一定不可以使用過(guò)多的檢測(cè)試劑。如果濃度過(guò)高，或者未正確稀釋?zhuān)瑒t會(huì)導(dǎo)致高背景。也不要顯色過(guò)度，如有必要，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。