小鼠Elisa試劑盒使用指南：從樣本處理到結(jié)果解讀的全程指導
點擊次數(shù)：313 更新時間：2024-10-15
小鼠ELISA試劑盒是生物醫(yī)學研究中常用的工具，用于定量檢測小鼠血清、血漿、細胞裂解液等樣本中的特定目標蛋白。為了確保實驗結(jié)果的準確性和可靠性，從樣本處理到結(jié)果解讀的每一步都需要嚴格遵循操作指南。
一、樣本處理
樣本處理是ELISA實驗的第一步，也是至關重要的一步。不同類型的樣本需要不同的預處理方法。
血清：將采集的血液樣本在室溫下放置2小時或4℃過夜，使其自然凝固。然后，以1000×g離心20分鐘，收集上清液（血清）。建議在-20℃或-80℃下保存，避免反復凍融。
血漿：使用含抗凝劑的采血管采集血液樣本，采集后30分鐘內(nèi)，4℃下以1000×g離心15分鐘，收集上清液（血漿）。同樣，建議在-20℃或-80℃下保存。
細胞裂解液：細胞裂解液需要經(jīng)過裂解處理，以釋放細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。這通常涉及反復凍融或使用超聲波細胞破碎器。裂解后，以高速離心去除細胞碎片，收集上清液。
二、實驗準備與操作
在實驗開始前，確保所有試劑和樣本都已平衡至室溫。按照試劑盒說明書準備標準品、樣本稀釋液、檢測抗體等。
加樣：在酶標包被板上設置標準品孔和樣本孔，加入不同濃度的標準品和待測樣本。
加酶：每孔加入酶標試劑，然后封板并置于37℃溫育一段時間。
洗滌：溫育后，小心揭掉封板膜，棄去液體，用洗滌液洗滌多次，確保充分去除殘留的液體。
顯色：加入顯色劑A和B，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色一段時間。
終止：加入終止液，終止反應。
三、結(jié)果解讀
使用酶標儀在450nm波長處讀取各孔的吸光度值。根據(jù)標準曲線計算樣品中目標蛋白的濃度。標準曲線是通過將標準品濃度與相應的吸光度值進行關聯(lián)而繪制的。
四、注意事項
嚴格按照試劑盒說明書操作，避免交叉污染。
洗滌步驟要che底，確保充分去除殘留的液體。
避光保存試劑盒和底物溶液，避免光照影響試劑活性。
實驗結(jié)束后，及時清理實驗臺面和器材，并進行消毒。
通過以上步驟，您可以成功使用小鼠ELISA試劑盒進行目標蛋白的定量檢測。希望這份全程指導對您有所幫助！
